2結(jié)果
2.1陰溝腸桿菌2025菌落形態(tài)
三區(qū)畫線菌落形態(tài)如圖1所示，LB培養(yǎng)基菌落(左)形態(tài)光滑濕潤(rùn)，呈圓形灰白色;APW培養(yǎng)基(右)形態(tài)光滑濕潤(rùn)、呈灰白色、生長(zhǎng)狀況較LB培養(yǎng)基更為旺盛。
圖1陰溝腸桿菌2025菌落形態(tài)
2.2陰溝腸桿菌2025 16S rRNA系統(tǒng)發(fā)育樹
將分離菌株16S rRNA測(cè)序序列與NCBI網(wǎng)站BLAST在線軟件進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示，分離菌株與陰溝腸桿菌strain RCB 980的16S rRNA序列相似度高達(dá)98.88%。通過系統(tǒng)發(fā)育樹可以看出，分離菌株菌種為陰溝腸桿菌，并將其命名為陰溝腸桿菌2025(圖2)。
圖2陰溝腸桿菌2025 16S rRNA系統(tǒng)發(fā)育樹
2.3陰溝腸桿菌2025藥物敏感性試驗(yàn)
34種抗生素比對(duì)結(jié)果顯示(表1)，陰溝腸桿菌2025對(duì)16種抗生素產(chǎn)生耐藥性，包括青霉素G、紅霉素及萬古霉素等;對(duì)亞胺培南、卡那霉素及四環(huán)素等7種抗生素耐藥性為中介;對(duì)其余11種抗生素表現(xiàn)出高敏感性，包括慶大霉素、諾氟沙星及環(huán)丙沙星等。
表1陰溝腸桿菌2025 34種抗生素藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果
抗菌藥物抑菌圈直徑折點(diǎn)/mm抑菌圈直徑/mm敏感性
耐藥(R)中介(I)敏感(S)
青霉素G≤28-≥29 0 R
苯唑西林≤10 11~12≥13 0 R
氨芐西林≤11 12~14≥15 0 R
羧芐西林≤19 20~22≥23 22 I
哌拉西林≤17 18~20≥21 27 S
頭孢氨芐≤14 15~17≥18 11 R
頭孢唑啉≤14 15~17≥18 0 R
頭孢拉定≤14 15~17≥18 12 R
頭孢呋辛≤16 17~19≥20 18 I
頭孢他啶≤14 15~17≥18 23 S
頭孢曲松≤13 14~20≥21 29 S
頭孢哌酮≤15 16~20≥21 18 I
亞胺培南≤13 14~15≥16 14 I
痢特靈≤14 15~16≥17 13 R
阿奇霉素≤13 14~17≥18 11 R
麥迪霉素≤13 14~17≥18 0 R
紅霉素≤13 14~22≥23 0 R
慶大霉素≤12 13~14≥15 15 S
新霉素≤12 13~16≥17 15 I
卡那霉素≤13 14~17≥18 15 I
丁胺卡那≤14 15~16≥17 14 R
左氧氟沙星≤13 14~16≥17 27 S
諾氟沙星≤12 13~16≥17 20 S
環(huán)丙沙星≤15 16~20≥21 30 S
復(fù)方新諾明≤10 11~16≥17 0 R
萬古霉素≤14 15~16≥17 0 R
多黏菌素B≤8 9~11≥12 15 S
四環(huán)素≤14 15~18≥19 17 I
多西環(huán)素≤12 13~15≥16 16 S
米諾環(huán)素≤14 15~18≥19 12 R
氯霉素≤12 13~17≥18 23 S
克林霉素≤14 15~20≥21 0 R
鏈霉素≤11 12~14≥15 11 R
氟苯尼考≤12 13-17≥18 27 S
2.4噬菌體ZX14形態(tài)表征
噬菌體ZX14噬菌斑直徑約1 mm，外無暈圈(圖3A)。透射電子顯微鏡下觀察，噬菌體ZX14有二十面體的頭部和可收縮的尾部，頭部長(zhǎng)度約100 nm，頭部直徑約75 nm，尾部長(zhǎng)度約100 nm，尾部直徑約20 nm(圖3B)。
圖3噬菌體ZX14噬菌斑形態(tài)及透射電子顯微鏡觀察
2.5噬菌體ZX14生物學(xué)特性測(cè)定
最佳MOI的測(cè)定可以反映噬菌體裂解速率。如圖4A所示，當(dāng)MOI=1時(shí)，噬菌體ZX14效價(jià)最高，達(dá)到2.5×109 PFU/mL。一步生長(zhǎng)曲線是噬菌體裂解周期的最佳體現(xiàn)。通過一步生長(zhǎng)曲線來確定噬菌體ZX14的潛伏期和裂解期。如圖4B所示，噬菌體ZX14在0~20 min效價(jià)無明顯變化，表明其潛伏期為20 min，20~80 min效價(jià)開始明顯上升，表明其裂解期為60 min。經(jīng)計(jì)算可得裂解量為45 PFU/cell。
圖4噬菌體ZX14一步生長(zhǎng)曲線(A)與最佳MOI(B)測(cè)定
2.6噬菌體ZX14穩(wěn)定性鑒定
熱穩(wěn)定性測(cè)試顯示(圖5A)，噬菌體在37~50℃環(huán)境下活性穩(wěn)定。在60℃下孵育20 min、40 min和60 min后，噬菌體滴度分別由5×108 PFU/mL降至2×107 PFU/mL，2.4×106 PFU/mL和3.5×106 PFU/mL。在70℃下孵育20 min后，噬菌體活性完全喪失。
圖5噬菌體ZX14穩(wěn)定性曲線
如圖5B所示，噬菌體ZX14在pH 5~12緩沖液中處理1 h能保持活性穩(wěn)定，效價(jià)均≥5×108 PFU/mL。pH 7時(shí)效價(jià)最高，為1.5×1010 PFU/mL，在pH 12時(shí)，效價(jià)降低為5×108 PFU/mL，pH 5時(shí)，效價(jià)降低為8×108 PFU/mL，在pH≤3和pH≥13時(shí)完全失活。
ZX14在氯仿體積比為0.2%、0.5%、1%、2%、3%、4%時(shí)效價(jià)僅在1×1010 PFU/mL與1×1011 PFU/mL之間輕微波動(dòng)，表明噬菌體ZX14有著良好的氯仿耐受性(圖5C)。
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